النتائج 1 إلى 12 من 12



الموضوع: شرح المرحلة الثانية من طرق تشخيص الاحياء الدقيقة ....

  1. #1
    تاريخ التسجيل
    Apr 2006
    الدولة
    جــــــــده ( عروس البحر الاحمر )
    المشاركات
    984

    افتراضي شرح المرحلة الثانية من طرق تشخيص الاحياء الدقيقة ....

    راح اشرح المرحلة الثانية بالتفصيل بناء على طلب بعض الاعضاء ...



    المرحلة الثانية : الكشف عن جزيئات خاصة بالكائن المسبب للمرض

    1- الكشف عن انتجينات البكتريا :
    وتتميز الطرق التالية بالسرعه والدقه والسهوله اكثر من الطرق التالقيه المناعيه السابقه ... وهي :
    1- طرق الفحص المناعي الانزيمي ( EIA ) :
    ومعظمها تستخدم اجسام مضاده مرتيطه مع سطح صلب ( مثل الاغشية والاطباق الرقيقة ) لاجراء التجربه من اجل الارتباط بالانتجين ( Ag ) في العينات السائله اذ انه بعد ارتباط الانتجين بالاجسام المضاده الموجوده والمحضرة يتم اضافة اجسام مضاده معلمه بالانزيمات متخصصه الى المزيج , ثم يتم اضافة الماده الاساس الخاصه بالانزيم من اجل اعطاء تفاعل مرئي نتيجه لذلك , الذي يمكن مشاهدته باجهزة خاصه .
    وتكون هذه العملية ناجحه في حال كون الجسم المضاد المحضر اصلا خاص بالانتجين المضاف والذي يرتبط معه ولايتم ازالته بعمليات الغسيل المستمر .
    بينما اذا كان الانتجين المضاف من نوع مغاير للجسم المضاد فان الانتجين لايلتصق بالجسم المضاد , وبالتالي يتم ازالته بعمليات الغسيل , وتكون النتيجه في هذه الجاله سلبيه ( Negative) .

    ويمكن من خلال هذه الطريقه الكشف عن العديد من الجراثيم في العينات المباشره , فمثلا يمكن الكشف عن بكتريا ( Streptococcal Pharyngitis ) في مسحة swab مأخوذه من الحلق خلال 5 - 10 دقائق وتصل دقة وحساسية هذا الفحص الى 95 % في مجمل الحالات .. كذلك يمكن الكشف عن الكلاميديا وسموم بكتريا Clostridium Difficile والعديد من الفيروسات حيث يمكن الحصول على النتيجه خلال 10 دقائق الى 3 ساعات من بدء التجربه .
    التجربه :
    1- الكشف المباشر عن الانتيجينات بطريقة ELISA .
    1- اضافة العينه ( مصل الدم ) الى اجسام مضاده خاصه ملتصقه بسطح صلب .
    2- اضافة اجسام مضاده معلمة بالانزيمات متخصصة بالانتجين المراد الكشف عنه .
    3- اضافة الماده الاساس Substrate لينتج التفاعل اللوني .
    2- الكشف عن الاجسام المضاده ( IgM ) بطريقة ELISA .
    1- اجسام مضاده خاصه بالنوع ( IgM )ملتصقه بسطح صلب .
    2- اضافة العينة المحتوية على IgM .
    3- اضافة الانتيجينات الخاصه بهذا الجسم المضاد .
    4و5- كما في الخطوات 2 و 3 من الكشف المباشر .


    2- طريقة التخثر :
    وتتلخص بتحضير جزيئات كبيرة Latex مغطاه باجسام مضاده خاصه بنوع معين من الانتجينات , ثم خلطها مع العينه المحتويه على الانتجين وعند وجود الانتجين الخاص بالاجسام المضاده المحضره فان النتيجه الايجابيه ( Positive ) تكون على شكل تخثر وتجمع للمزيج على شكل حبيبات صغيره .
    اذ تكون المنطقه (FC ) من الجسم المضاد IgG هي المربوطه مع الجزيئات الكبيره او مع بروتين A لبكتريا Staphylococcus Aureus بينما تكون المنطقه (Fab ) حره قادره على الارتباط مع النوع الخاص بها من الانتجينات .
    ومن الامثله المهمه على هذا النوع التقنيه الطقم ( kit ) المحضر الجاهز لتشخيص التهاب السحايا البكتيري حيث يحتوي على 5 عبوات كل واحده تحتوي اجسام مضاده خاصه بواحده من الخمسه انواع الشائعه للبكتريا المسببه للسحايا بحيث تكون الاجسام المضاده ملتصقه على جزيئات Latex ويتم التفاعل بخلط نقطه واحده من السائل النخاعي الشوكي CSF مع نقطه من كل عبوه ويكون حدوث التخثر بعد التحريك دليلا على وجود انتجين البكتريا في CSF .

    وتستخدم هذه التقنيه في كثير من الفحوصات مثل CRP وفحص الروماتيزم RA - F وفحص ASOT وغيرها من فحوصات التخثر .

  2. #2
    تاريخ التسجيل
    Apr 2006
    الدولة
    جــــــــده ( عروس البحر الاحمر )
    المشاركات
    984

    افتراضي

    2- الكشف عن تسلسل الحامض النووي :


    1- فحص الاستدلال على الحامض النووي للكائن الدقيق :
    وتستخدم هذه التقنيه للكشف السريع عن البكتريا في العينات المرضيه او مزارع الاحياء الدقيقه التي يشكل عزلها عمليه معقده مثل بكتريا السيلان Neisseria gonorrhoeae و C.trachomatis
    وتبنى هذه التقنيه على ان اي نوع من DNA يحمل شيفره لتسلسل معين من الجينات حيث يتم عزل DNA وتحطيمه على شكل خطوط منفرد ليستخدم في انتاج DNA مكمل C.DNA الذي يستخدم كدليل Prpbe يتم الكشف من خلاله فيما بعد على rRNA في اي عينه تحتوي على نفس الكائن الحي الدقيق الذي اخذ منه DNA الاصلي .
    يستخدم جهاز خاص للقيام بهذا الفحص ولكن ارتفاع سعره والمواد المستخدمه في الفحص تعتبر من سيئات هذه التقنيه .

    2- فحص PCR :
    وتسمى (تقنية تكثير الماده الوراثيه )المعزوله من دم المريض .. وتعتمد على الكشف المباشر على مستوى الاحماض النوويه ( DNA by PCR )
    يستخدم هذا الفحص لتشخيص كثير من الاحياء الدقيقه في العينات المرضيه , ويعتمد على تكثير DNA الكائن الدقيق الموجود في العينه المرضيه من اجل اجراء الفحوصات اللازمه على DNA بسهوله .
    وتتلخص هذه التقنيه :
    1- يتم عمل مزيج من المكونات التاليه :
    1- ال DNA المراد التعرف عليه .
    2- جين بدء Primers قادر على الارتباط بشريط ال DNA في نقطه معينه .
    3- انواع متعدده من النيوكلوتيدات .
    4- انزيم بلمره مقاوم للحراره .
    اذ انه من الضروري اضافة جينات البد Primers والنيوكلوتيدات بكميات كبيره الى المزيج .

    2- يوضع المزيج في جهاز حراري خاص Thermocycler مجهز لتغيير درجة الحراره وتنظيم خطوات PCR الثلاثه التاليه :
    1- يتم فصل ال DNA الى شريط مفرد على درجة حراره 90 - 95 م .
    2- يبرد المزيج الى درجة حراره 50 م ليتم السماح لجين البدء بالارتباط في موقعه المخصص على شريط DNA من اجل بدء انتاج سلسله مكمله لشريط ال DNA الاصلي .
    3- يتم زيادة درجة الحراره الى 72 م بحيث يبدأ انزيم البلمره باضافة النيوكلوتيدات الى جين لتكون سلسلة DNA مكمله ومقابله للشريط الاصلي .

    3- تكرر هذه العمليه لمرات متعدده لانتاج ملايين النسخ من DNA الكائن الدقيق المراد تكثيره .

    ملاحظه : العينات المستخدمه في PCR هي EDTA Blood ... وموعد النتيجه خلال 3 أيام




    شرح مبسط ل( PCR) :

    1- فصل سلسلتي الحامض النووي dsDNA
    2- اضافة النيوكلوتيدات وانزيم البلمرة وجين البدء
    3- ترجمة DNA وانتاج نسخ متعدده منه

    انشاء الله يكون وضح الشرح ؟؟؟

  3. #3
    تاريخ التسجيل
    Sep 2006
    الدولة
    جمهورية مصر العربيةــــ القاهره
    المشاركات
    1,262

    افتراضي

    شرح جميل ومنسق واكثر من رائع اختى الغالية رغودة...وموضوع مفيددد..

    جزاكى الله كل خيررر ..وفقك الله دائماا...

  4. #4
    تاريخ التسجيل
    Jan 2007
    الدولة
    مملكة الأمن والأمان أرض الحرمين الشريفين
    المشاركات
    1,182

    افتراضي

    رائع ... وفقك الله رغودة ...

  5. #5
    تاريخ التسجيل
    Mar 2007
    الدولة
    بلد الرافدين
    المشاركات
    167

    افتراضي

    كيفك اختي رغوده ارجو ان تساعديني ياي شي يخص التحليلات المرضيه وجزاكي الله خيرا

  6. #6

    افتراضي

    ماشاء الله.شرح رائع ......

  7. افتراضي

    غاليتي

    رغودة

    اسعد الله اوقاتكِ بالخير والبركات

    سلمتِ علي روعة وجمال ما طرحتِ لنا

    دمتِ لنا ودام قلمكِ الرائع

    تحـــــــــــــــــياتي

    العصفورة الجريحة

  8. #8

    افتراضي

    مشكورة رغودة مواضيعك كتير حلوة

    ننتظر المزيد ...

  9. #9
    تاريخ التسجيل
    Apr 2006
    الدولة
    جــــــــده ( عروس البحر الاحمر )
    المشاركات
    984

    افتراضي

    شكرا redrose

  10. #10
    تاريخ التسجيل
    Apr 2006
    الدولة
    جــــــــده ( عروس البحر الاحمر )
    المشاركات
    984

    افتراضي

    شكرا لمرورك الكريم اخوي د.عبد الرحمن

  11. #11

    افتراضي

    الله يجعل ايامك السعيدة كثيرة

  12. #12

    افتراضي

    ادعولي عندي بكرة مناقشة الدكتوراة بتاعتي في elisa and rt-pcr علي الفيروس


ضوابط المشاركة

  • لا تستطيع إضافة مواضيع جديدة
  • لا تستطيع الرد على المواضيع
  • لا تستطيع إرفاق ملفات
  • لا تستطيع تعديل مشاركاتك
  •